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蛋白免疫印迹杂交
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蛋白免疫印迹杂交用来鉴定电泳分离的样品中是否存在某特定蛋白。样品通过聚丙酰胺凝胶电泳,也称SDS-PAGE得到分离后,再通过凝胶转移将蛋白质从聚丙酰胺凝胶转移到一张膜上,这样可将蛋白质固定在其特定的分离位置。接下来,用抗体对膜进行杂交,这一过程称之为免疫杂交。免疫杂交是通过抗体与目标蛋白、以及抗体与抗体之间特定识别位点的结合来实现,它的高特异性使得可以鉴定单一蛋白。对抗体的识别则用含酶的报告系统来完成。酶结合在抗体的末端,与底物起反应产生颜色或者光的变化。这些信号会被捕捉成像,并可用光密度计量学对其进行定量。

本视频文章将通过讲解凝胶转移,抗体识别和图像分析来全面介绍蛋白免疫印迹技术。将重点讨论凝胶转移步骤中的关于如何搭建转移三明治和凝胶转移条件、以及抗体结合与抗体识别的基本原理。我们还将举例说明该技术的广泛应用,包括检测蛋白质之间的相互作用和在蛋白复合物中鉴定单个蛋白。

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